CCK8試劑盒日本同仁利用了同仁化學(xué)研究所(Dojindo)開發(fā)的四唑鹽——WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，它在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料。CCK-8溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中;不需要預(yù)配各種成分。CCK-8法是用于測定細(xì)胞增殖或細(xì)胞毒性試驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法。CCK-8被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的橙色甲臜染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中，生成的甲臜量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。WST-8法檢測細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)的靈敏度比其它四唑鹽如MTT, XTT, MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相當(dāng)穩(wěn)定，并且對細(xì)胞沒有毒性，因此可以長時(shí)間孵育。

　　CCK8試劑盒日本同仁檢測步驟

　　1. 向各孔中加入100 μl細(xì)胞懸液。a)

　　2. 在37℃下預(yù)孵育培養(yǎng)板。b)

　　3. 向各孔中加入各濃度的待測溶液c)10 μl。

　　4. 37℃下孵育。

　　5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。

　　6. 37℃下孵育1-4小時(shí)。e)

　　7. 測定450 nm處的OD值。

　　a) 使用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基制備50,000-100,000個(gè)/ml的細(xì)胞懸液。

　　b) 建議使用CO2培養(yǎng)箱guo夜預(yù)培養(yǎng)。

　　c) 使用培養(yǎng)基或PBS來制備溶液。

　　d) 如果待測溶液有還原性，測定不含細(xì)胞，但含有CCK-8的待測溶液在450 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入CCK-8 ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的100 μl培養(yǎng)基和10 μl CCK-8進(jìn)行檢測。

　　e) 白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時(shí)間。